对多克隆抗体制备你了解多少？

　　多克隆抗体制备是一个涉及多个步骤和精细操作的过程，其目的是通过免疫动物(通常是兔子或小鼠)来生成能够识别特定抗原的多种抗体混合物。
 

　　一、抗原准备
 

　　1.抗原的选择与处理：抗原是能引起机体免疫反应的物质，具有抗原性和免疫原性。抗原通常需要经过纯化，以确保其纯度和特异性。对于半抗原，需要偶联到大分子载体蛋白上，如BSA、OVA或HSA，以增强其免疫原性。
 

　　2.抗原的乳化：将抗原与佐剂按一定比例混合，并通过剧烈振荡使其充分乳化。乳化过程至关重要，因为未乳化的抗原会影响免疫效果。
 

　　二、免疫动物
 

　　1.动物选择：常用的免疫动物包括新西兰大白兔、日本大耳白兔等。选择健康、体重适中的动物，并确保它们在免疫前已适应新环境。
 

　　2.免疫方案：根据抗原的性质和所需抗体的量，制定合适的免疫方案。通常采用皮下或皮内多点注射法，每隔一定时间(如2-4周)进行一次免疫，共免疫数次(如4-5次)。
 

　　3.血清收集：在每次免疫后的一段时间内(如7-10天)，通过心脏采血或颈动脉放血等方式收集血液。收集的血液需置于37℃烘箱中凝固，然后转入4℃过夜，通过离心分离出血清。
 

　　三、多克隆抗体的检测与纯化
 

　　1.效价检测：通过ELISA、WesternBlot等方法检测抗血清的效价和特异性。效价达到一定水平后，即可进行抗体的纯化。
 

　　2.抗体纯化：采用亲和层析等方法对抗体进行纯化。例如，将抗原偶联到CNBr-activatedSepharose4B上，制备成亲和层析柱。然后将抗血清通过亲和层析柱，使特异性抗体与抗原结合，再通过改变pH值或使用洗脱液将抗体从柱上洗脱下来。
 

　　3.抗体保存：纯化后的抗体可以加入甘油等保护剂，分装后储存于-20℃或更低温度下，以保持其活性和稳定性。