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ARTICLES酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。分为夹心法,间接法和竞争法三种。
ChiRP(Chromatin Isolation by RNA Purification )是一种检测与RNA绑定的DNA和蛋白相互作用的方法。该方法是通过设计生物素或链霉亲和素探针,把目标RNA拉下来以后,与其共同作用的DNA染色体片段就会附在到磁珠上,后通过qRT-PCR、测序、免疫印迹法和质谱分析等确定目的RNA、DNA和RNA结合蛋白(RBPs)。
研究DNA结合蛋白与其靶DNA之间相互作用的主要实验手段之一。原理及流程如下: 链亲和素磁珠能够与生物素标记DNA/蛋白复合物结合。在磁场下或通过离心使结合物与上清液分离,吸弃上清液并洗涤磁珠,然后用SDS样品液使蛋白变性而与磁珠分离。分离液中的蛋白质用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)或双向电泳分离,SDS PAGE用高灵敏度考马斯亮蓝(CBB)染色。然后从染色胶上切下所需蛋白带进行质
RNA pull down实验 检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间的相互作用。使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用。
荧光素酶报告基因是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence)。与荧光蛋白不同的是,荧光素酶不需要额外光源,但是需要加入荧光素。
CHIP-seq,指的是结合位点分析法,作用为研究体内蛋白质与DNA相互作用。染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)也称结合位点分析法,是研究体内蛋白质与DNA相互作用的有力工具,通常用于转录因子结合位点或组蛋白特异性修饰位点的研究。
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